什么是單克隆抗體介紹

　　因單一克隆B細胞雜交瘤產生的，只識別抗原分子某一特定決定簇的特異性抗體。那么你對單克隆抗體了解多少呢?以下是由學習啦小編整理關于什么是單克隆抗體的內容，希望大家喜歡!

　　什么是單克隆抗體

　　單克隆抗體由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體，稱為單克隆抗體。通常采用雜交瘤技術來制備，雜交瘤(hybridoma)抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養成細胞群，可制備針對一種抗原表位的特異性抗體即單克隆抗體。

　　單克隆抗體制備過程

　　1、免疫動物

　　免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。

　　2、細胞融合

　　采用二氧化碳氣體處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內擠壓研磨，制備脾細胞懸液。 將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發生融合，形成雜交瘤細胞。

　　3、選擇性培養

　　選擇性培養的目的是篩選融合的雜交瘤細胞，一般采用HAT選擇性培養基。在HAT培養基中，未融合的骨髓瘤細胞因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶，不能利用補救途徑合成DNA而死亡。 未融合的淋巴細胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶，但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡。 只有融合的雜交瘤細胞由于從脾細胞獲得了次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶，并具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性，因此能在HAT培養基中存活和增殖。

　　4、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化

　　在HAT培養基中生長的雜交瘤細胞，只有少數是分泌預定特異性單克隆抗體的細胞，因此，必須進行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進行雜交瘤細胞的克隆化培養。采用靈敏、快速、特異的免疫學方法，篩選出能產生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細胞，并進行克隆擴增。經過全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識別抗原的表位及其分子量后，及時進行凍存。

　　5、單克隆抗體的大量制備

　　單克隆抗體的大量制備主要采用動物體內誘生法和體外培養法。

　　(1)體內誘生法 取BALB/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液體石蠟或降植烷進行預處理。1-2周后，腹腔內接種雜交瘤細胞。雜交瘤細胞在小鼠腹腔內增殖，并產生和分泌單克隆抗體。約1-2周，可見小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可獲得大量單克隆抗體。

　　(2)體外培養法 將雜交瘤細胞置于培養瓶中進行培養。在培養過程中，雜交瘤細胞產生并分泌單克隆抗體，收集培養上清液，離心去除細胞及其碎片，即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種方法產生的抗體量有限。各種新型培養技術和裝置不斷出現，大大提高了抗體的生產量。

　　單克隆抗體的鑒定實驗

　　1.雜交瘤細胞染色體的檢查采用秋水仙素裂解法進行。

　　2.單克隆抗體的類型、亞型的測定：購買兔抗小鼠Ig類型和亞型的標準抗血清，采用瓊脂擴散法或ELISA夾心法測定單抗的Ig類型和亞型。

　　3.單抗的特異性鑒定可以采用各種方法，如免疫熒光法、ELISA法、間接血凝和免疫印跡技術等，同時還需做免疫阻斷試驗等。

　　4.單抗的效價測定可采用凝集反應、ELISA或放射免疫測定。不同的測定方法效價不同。培養上清液的效價遠不如腹水的效價。采用凝集反應，腹水效價可達5×104。而采用ELISA檢查，腹水效價可達1.0×106。單抗的效價以培養上清和腹水的稀釋度表示。

　　5.必要時還可以測定單抗的親和力和識別抗原表位的能力測定。

　　一、試劑原理：

　　本試劑盒利用雙抗體夾心法鑒定小鼠淋巴細胞雜交瘤培養上清中單克隆抗體或特異親和純化的單克隆抗體的類和亞類(可區分出IgG1\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA)。采用小鼠抗體共有位點的二抗包被微孔板，與加入的培養上清中的小鼠抗體結合，再加入HRP標記的抗小鼠各類、亞類的抗體來分別反應，最后用TMB底物系統顯色并用稀硫酸終止，再通過酶標儀檢測吸光度來判斷被測單克隆抗體的類或亞類。本試劑盒具有極高的分辨率，是您鑒定小鼠單克隆抗體類、亞類的可靠工具。

　　二、使用范圍：

　　用于小鼠單克隆抗體Ig類、亞類的鑒定以及相關內容的研究。

　　三、使用方法：

　　1、首先將試劑盒恢復室溫(大約30分)，然后用純水把清洗液配成工作濃度(一份濃縮清洗液加19份純水)。

　　2、取出酶標板。每個標本需要6孔，陽性對照6孔。多余的用自封袋保存，記得放入干燥劑。

　　3、將細胞培養上清(或特異親和純化的抗體)50μl加入酶標微孔板，每個標本加6孔，陽性對照也是加6孔每孔50μl。然后每孔再加入50μl標本稀釋液。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。

　　4、棄去板內液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。再在每個標本的6孔中分別加入6種酶標二抗各100μl，通用陽性對照的6孔也一樣。在加樣圖上或酶標板上做好標記。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。

　　5、吸棄板內液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。每孔分別加入顯色劑A和顯色劑B各50μl，換一張新的封板膜貼板避光37℃顯色20分鐘。

　　6、本試劑盒特異性好一般肉眼即可觀察出結果，看顯色藍的那個孔所對應的酶標二抗就知道此標本的Ig類或亞類。更可將反應終止液(每孔50μl)終止反應后用酶標儀450nm測定波長，630nm參考波長雙波長測定結果，參看高值孔所對應的酶標二抗就知道此標本的Ig類或亞類。陽性對照0D小于0.5實驗無效，需要重做。