蛹蟲草母種培養基配方優化的研究論文

　　培養基(Medium)是供微生物、植物組織和動物組織生長和維持用的人工配制的養料，一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。不同培養基可根據實際需要，添加一些自身無法合成的化合物，即生長因子。有些微生物，如自養型微生物，不需要碳源，所以上述物質只具有一般性。以下是學習啦小編今天為大家精心準備的：蛹蟲草母種培養基配方優化的研究相關論文。內容僅供參考，歡迎閱讀!

　　蛹蟲草母種培養基配方優化的研究全文如下：

　　蛹蟲草[Cordyceps militaris (L.)Link.]又稱北冬蟲夏草,北蟲草,與冬蟲夏草同屬異種,隸屬真菌門、子囊菌亞門、核菌綱、麥角菌科、蟲草屬,是蛹蟲草真菌寄生在鱗翅目夜蛾科昆蟲蛹體上形成的子座與蛹體的結合體[1-2]。蛹蟲草是著名的食藥用菌,具有較高藥用價值,具有補肺益腎、抗疲勞、抗腫瘤、抗衰老、美容養顏等保健作用,以及顯著增強免疫力的功能[3-4]。其菌體內蛋白質含量高達40%以上,氨基酸種類齊全(其中含有人體必須的8種氨基酸),并含有鋅、銅、硒等多種微量元素,其維生素不但種類多,且含量極為豐富。蟲草屬真菌的深層培養,主要目的是大批量生產菌絲體,并從培養液中提取蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖、甘露醇、SOD等多種有效成分[5-6]。經中國中醫研究所等權威機構檢測發現,蛹蟲草中各種有效成分的含量均接近甚至超過冬蟲夏草。近年來,人們把人工培育的蛹蟲草作為冬蟲夏草的替代品,以替代天然冬蟲夏草的不足。研究表明,蛹蟲草的菌絲體和子實體具有基本相同的有效成分及藥用與滋補功效。

　　蛹蟲草母種培養基的研究已有一些報道,但所述培養基各有不同,產量與品質也高低不一,這種情況嚴重影響其產業發展。在蛹蟲草的母種培養中,培養基的配方是否優良,直接影響菌絲體的生長。因此,對蛹蟲草母種培養基進行優化研究,篩選出適合蛹蟲草菌絲體生長的最佳母種配方具有一定的理論與實際意義。本試驗以不同的研究人員試驗獲得的6種母種培養基為基礎,以菌種初萌發時間、菌絲長速、菌絲長勢、滿管時間為指標,篩選出母種培養基的最佳配方,以期應用于蛹蟲草的生產和科學研究。 [論文網]

　　材料和方法：

　　1.1 菌 種

　　蛹蟲草試管母種由華中農業大學微生物教研室提供。

　　1.2 主要儀器

　　不銹鋼立式壓力蒸汽滅菌器,上海申安醫療器械廠生產,型號:LDZX-30FB;超凈工作臺,蘇凈集團安泰公司制造,型號:SW-CJIFD;恒溫培養振蕩器,天津市歐諾儀器儀表有限公司生產,型號:HNY-2102。

　　1.3 培養基設計

　　根據蛹蟲草生長所需營養條件及不同研究人員提供的最佳配方確定。

　　1.3.1 配方1 葡萄糖10 g、蛋白胨10 g、瓊脂20 g、MgSO4 0.3 g、KH2PO4 0.5g 、VB1(50 mg·L-1)、蒸餾水1 L、pH值5~6。

　　1.3.2 配方2 葡萄糖10 g、牛肉膏10 g、瓊脂25 g、MgSO4 0.6 g、KH2PO4 2 g、乙酸鈉5 g、檸檬酸二胺2 g、MnSO4 0.25 g、吐溫80 mL、酵母粉5 g或酵母膏10 g、蒸餾水1 L、pH值6.2~6.4。

　　1.3.3 配方3 蛋白胨10 g、牛肉膏3 g、瓊脂17 g、NaCl 5 g、蒸餾水1 L、pH值7.2左右。

　　1.3.4 配方4 葡萄糖10 g、瓊脂20 g、MgSO4 1 g、KH2PO4 1.5 g、VB1(50 mg·L-1)、CaCO3 1 g、蒸餾水1 L、pH值5~6。

　　1.3.5 配方5 葡萄糖15 g、檸檬酸銨 2.5 g、瓊脂20 g、乙酸鈉5.5 g、MgSO4 0.65 g、MnSO4 0.3 g、KH2PO4 1.5 g、蒸餾水1 L、pH值自然。

　　1.3.6 配方6 20%馬鈴薯提取液中加入1%葡萄糖、1%蛋白胨、2%瓊脂、0.5%KH2PO4、0.3%MgSO4、VB1(10 mg·L-1)、蒸餾水1 L、pH值5.8。

　　1.4 方法步驟

　　1.4.1 培養基制備、分裝與滅菌 按培養基制備的常規技術,分別制作以上6種配方培養基。配方中有馬鈴薯者,將馬鈴薯削皮、去掉芽眼切塊(0.5 cm×1 cm),稱質量。置沸水中煮30 min,用4層紗布過濾擠壓取其汁液至于燒杯中,同時加入瓊脂及其它藥品攪拌使其充分溶解,加水定容至1 L,測定并調整酸堿度。將制備的培養基分別裝入試管中,裝量為管高的1/4。每種配方裝6支試管,塞上棉塞封口,捆扎。在壓強1.14×105 MPa、溫度120 ℃下高壓滅菌30 min后,待高壓鍋的氣壓降至0,將試管取出冷卻并擱置斜面,然后將其放入28~30 ℃室溫中培養48 h進行無菌檢驗。檢查完畢將其置于超凈工作臺中備用。

　　1.4.2 接種與培養 接種前將母種菌株擱置在恒溫箱中活化1 d,然后菌種移入接種室,在超凈工作臺中按無菌操作要求,向試管斜面中央接種,接種塊大小為5 mm×25 mm。注意接種塊不要碰到其它部位,以免影響菌種萌發后菌絲體的觀察。每種培養基配方接6支試管。接種后移入恒溫箱中培養,培養條件為18.5~19 ℃,無光照。接種后每2 d記錄菌落形成及菌絲生長情況。

　　1.4.3 測定菌絲長速 菌絲長速是菌絲生長的指標。將菌絲接種到斜面培養基中,每天測量1次菌落直徑,直至菌落滿管為止。觀察并記錄每種配方6支試管中菌絲的生長情況,重復3次取其平均值。

　　1.4.4 統計滿管天數 滿管天數是菌種接種到斜面培養基上,到菌絲布滿斜面所需要的時間。觀察并記錄每種配方6支試管的滿管時間,重復3次取其平均值。

　　1.4.5 觀察菌種初萌發天數 從菌種接種到培養基上開始觀察,到接種塊周圍長出白色絨毛狀菌絲體,這段時間為菌種初萌發時間。從接種開始,每24 h觀察并記錄每種配方6支試管中菌種的萌發情況,重復3次取其平均值。

　　1.4.6 觀察菌絲長勢 菌絲長勢是評價菌絲生長情況的重要指標。以菌絲的潔白程度、生長健壯程度、菌絲濃密程度、菌臺厚度為指標,觀察并記錄每種配方6支試管中菌絲的長勢。觀察結果用很強、強、較強、弱4個等級表示。