高二生物下冊《DNA的粗提取與鑒定》考點聚焦
高二生物下冊《DNA的粗提取與鑒定》考點聚焦
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高二生物下冊《DNA的粗提取與鑒定》考點聚焦
一、考點知識解讀
1.實驗原理
(1)粗提取原理：在NaCl溶液濃度低于0.14mol/L時，DNA的溶解度隨NaCl溶液濃度的增加而降低;在0.14mol/L時，DNA的溶解度最小;當NaCl溶液濃度繼續增加時，DNA溶解度又增大。
(2)純化原理：DNA不溶于酒精，但細胞中的某些蛋白質溶于酒精。
(3)鑒定DNA原理：在沸水浴條件下，DNA遇二苯胺會被染成藍色。
2.實驗材料的選擇及處理
(1)不選擇豬血等哺乳動物的血液，因為哺乳動物成熟的紅細胞無細胞核。
(2)需要在雞血中加入抗凝劑——檸檬酸鈉溶液，防止血液凝固。
(3)需除去雞血中的血漿，因為血漿中無DNA。
特別提醒：不同生物的組織中DNA含量不同在選取材料時，應本著DNA含量高、材料易得、便于提取的原則。
3.實驗過程
步驟：提取細胞核物質→溶解核內DNA→析出DNA粘稠物→濾取含DNA的粘稠物→DN A粘稠物的再溶解→過濾含有DNA的氯化鈉溶液→提取含雜質較少的DNA→DNA的鑒定。
操作要點：(1)2次加蒸餾水：第一次是在是為了使血細胞吸水膨脹破裂，加水后必須充分攪拌使血細胞充分破裂;第二次加蒸餾水是為了稀釋氯化鈉溶液。
(2)3次加氯化鈉溶液：第一次加氯化鈉后，必須充分晃動燒杯，使二者混合均勻，加速染色質中DNA與蛋白質分離，使DNA充分游離并溶解在氯化鈉溶液中;第二次加氯化鈉溶液也是為了DNA的再溶解，這時溶液中的蛋白質含量已很少;第三次加氯化鈉溶液還是為溶解DNA。
(3)6次攪拌：除最后一次攪拌外前5次攪拌均朝一個方向:，并且在析出DNA、DNA再溶解和提取中，各步攪拌都要輕緩玻璃棒，不要直插燒杯底部防止DNA分子斷裂。
(4)3次過濾：第一次過濾，留濾液;第二次過濾，留粘稠物;第三次過濾，留濾液。注意這3次過濾都用紗布，獲得沉淀物或粘稠物的通常為多層，獲得濾液的紗布層數適當減少。
特別提醒：若以植物為實驗材料，步驟上大致相同，在材料的處理上有幾點不同：一是增加研磨步驟，目的是破壞細胞壁;二是加入洗滌劑，目的是溶解細胞膜及核膜;三是加食鹽，可加速細胞膜及核膜的破裂。
4.實驗注意事項
(1)用冷酒精濃縮和沉淀DNA時所用的95%酒精，必須經過充分預冷后才能使用，冷酒精與含 DNA的氯化鈉溶液體積比是2：1 。如果用冷酒精處理后，懸浮于溶液中的絲狀物較少，可將混合液放于冰箱中再冷卻幾分鐘，然后再用玻璃棒卷起絲狀物。
(2)雞血細胞破碎以后釋放的DNA，容易被玻璃容器吸附，由于細胞內DNA的含量本來就比較少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就會更少。因此，實驗過程中最好使用塑料的燒杯和試管，這樣可以減少提取過程中DNA的損失。
二、典型試題賞析
例1 下列關于“DNA的粗提取與鑒定”實驗原理與方法的敘述，錯誤的是( )
A.DNA在NaCl溶液中的溶解度隨著溶液濃度的減小而減小
B.向雞血細胞液中加入蒸餾水的目的是使其吸水漲破，釋放出其中的DNA
C.向濾液中加入冷卻酒精的目的是除去DNA中的雜質，純化DNA
D.向初步純化的DNA中加入二苯胺溶液，沸水浴后可觀察到溶液顯藍色
解析：DNA在0.14 mol·L-1的NaCl溶液中溶解度最小，在低于或高于這個濃度的條件下溶解度都會增大。向雞血細胞液中加入蒸餾水的目的是使其吸水漲破，釋放其中的DNA。利用DNA不溶于酒精而蛋白質等雜質溶于酒精的原理，向濾液中加入冷卻酒精可進一步將DNA與蛋白質分離開，獲得較純的DNA。鑒定DNA的方法是向DNA中加入二苯胺溶液，沸水浴加熱，溶液變藍。
答案：A
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