飼養(yǎng)層細(xì)胞的影響因素
飼養(yǎng)層細(xì)胞的影響因素
飼養(yǎng)層的影響，主要體現(xiàn)在飼養(yǎng)層種類、絲裂霉素處理飼養(yǎng)層的時(shí)間、飼養(yǎng)層細(xì)胞的代數(shù)和飼養(yǎng)層細(xì)胞的密度等。下面是學(xué)習(xí)啦小編精心為你整理的飼養(yǎng)層細(xì)胞的影響因素，一起來看看。
飼養(yǎng)層細(xì)胞的影響因素
飼養(yǎng)層種類
STO PMEF： 對各種動(dòng)物都較適宜，，但最可靠的方法還是根據(jù)動(dòng)物種類篩選最佳飼養(yǎng)層為宜。有研究表明，PMEF比STO更適合用于小鼠ES(胚胎干細(xì)胞)的培養(yǎng)。
UE(子宮上皮細(xì)胞)
BRL(大鼠肝細(xì)胞)等
動(dòng)物種類
需要經(jīng)過篩選來確定最適宜該種動(dòng)物ES分離克隆的飼養(yǎng)層
絲裂霉素處理滋養(yǎng)層的時(shí)間
目前絲裂霉素(常用有絲分裂阻斷劑)處理時(shí)間在小鼠成纖維細(xì)胞上一般要求為：在37攝氏度，5%二氧化碳飽和溫度的條件下處理24h，時(shí)間過短達(dá)不到預(yù)定目的，成纖維細(xì)胞不能被成功地抑制住，時(shí)間過長則使細(xì)胞老化，活性下降，分泌因子的能力降低，從而直接影響ES細(xì)胞增殖和分化的抑制。同時(shí)處理完的清洗工作也很重要，一般要求用無鈣鎂PBS沖洗4~5遍，以確保絲裂霉素的徹底清除。
飼養(yǎng)層細(xì)胞的代數(shù)及密度
以小鼠成纖維細(xì)胞為例，選3~5代，密度為10^6-10^7個(gè)/ml為宜，代數(shù)過低所含雜細(xì)胞太多，代數(shù)過高則細(xì)胞活力降低。
飼養(yǎng)層細(xì)胞的定義
在細(xì)胞培養(yǎng)中有分化抑制作用的單層貼壁細(xì)胞
所謂飼養(yǎng)層細(xì)胞就是指一些特定細(xì)胞(如顆粒細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、輸卵管上皮細(xì)胞等已在體外培養(yǎng)的細(xì)胞)，經(jīng)有絲分裂阻斷劑(常用絲裂霉素)處理后所得的細(xì)胞單層。是細(xì)胞培養(yǎng)，尤其是胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)常用的生長增值促進(jìn)劑和分化抑制劑。
在正常機(jī)體內(nèi)，細(xì)胞除了獲得一些血液來的營養(yǎng)外，還在細(xì)胞與細(xì)胞之間互換特殊的物質(zhì)，用于分裂分化和營養(yǎng)等。因而，在細(xì)胞體外培養(yǎng)中，除了正常的培養(yǎng)基外，先培養(yǎng)一層特殊的細(xì)胞，然后再在其上接種要實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞，這樣更能模擬體內(nèi)環(huán)境。這些特殊的細(xì)胞就是飼養(yǎng)層細(xì)胞，通常是成纖維類細(xì)胞，這些細(xì)胞可以提供實(shí)驗(yàn)細(xì)胞更好的營養(yǎng)，有的分化研究則是必須有飼養(yǎng)層細(xì)胞。
在體外的細(xì)胞培養(yǎng)中，單個(gè)的或數(shù)量很少的細(xì)胞不易生存與繁殖，必須加入其它活的細(xì)胞才能使其生長繁殖，加入的細(xì)胞稱之為飼養(yǎng)細(xì)胞(Feeder cell)。在細(xì)胞融合和單克隆的選擇過程中，就是在少量的或單個(gè)細(xì)胞的基礎(chǔ)上使其生長繁殖成群體，因此在這一過程中必須使用飼養(yǎng)細(xì)胞。
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